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    ELISA試劑盒如何做好優(yōu)化

    發(fā)布時(shí)間: 2015-08-24  點(diǎn)擊次數(shù): 964次

    ELISA試劑盒質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過程,許多重要的環(huán)節(jié)都會(huì)影響檢測(cè)質(zhì)量。每一行業(yè)產(chǎn)品都有好有壞,由于生產(chǎn)廠家繁多,讓消費(fèi)者在選擇這一塊有了很大的困擾。

    ELISA試劑盒
    加樣的優(yōu)化:
    在這一過程中,一般情況下有三次加樣,它們分別是加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測(cè)定的需低溫冰存。

    ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化:
    1.包被液的選擇:一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
    2.包被濃度的選擇:包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化,一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對(duì)特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。
    3.包被溫度的選擇:通常是4-8度條件下放置一個(gè)晚上或者37度保溫2小時(shí),我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持。
    4.包被抗原的選擇:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì),比如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。

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