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    干細(xì)胞的原代提取

    發(fā)布時(shí)間: 2011-04-28  點(diǎn)擊次數(shù): 2351次

     

    干細(xì)胞的原代提取

    神經(jīng)干細(xì)胞
    目前,神經(jīng)干細(xì)胞的分離方法主要有三種:無血清培養(yǎng)基自然篩選法、流式細(xì)胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。
    無血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用,也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無法較長時(shí)間地成活,而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并繁殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。

    步驟: (1)取胎腦;
    (2)用吸管吹吸使細(xì)胞分散均勻;
    (3)加小鼠神經(jīng)干*培養(yǎng)基培養(yǎng)。

     

    脂肪間質(zhì)干細(xì)胞
    分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞主要是通過膠原酶進(jìn)行消化,獲得細(xì)胞懸液。分離培養(yǎng)大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞的大致步驟如下:
    (1)取腹股溝處脂肪,充分剪碎;
    (2)加入膠原酶,將其轉(zhuǎn)移至離心管中進(jìn)行消化30分鐘,加入培養(yǎng)基終止消化;
    (3)離心,大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,接種至培養(yǎng)瓶中。

     

    骨髓間質(zhì)干細(xì)胞
    目前常用的分離MSC的方法有密度梯度離心法和全骨髓貼壁法。全骨髓貼壁法的原理是根據(jù)間質(zhì)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢特性,定期換液除去不貼壁細(xì)胞,從而達(dá)到純化與擴(kuò)增間質(zhì)干細(xì)胞的目的。
    步驟 : (1)取大鼠股骨和脛骨,以*培養(yǎng)基沖洗股骨和脛骨骨髓,轉(zhuǎn)移至離心管中,離心,去上清;
    (2)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,接種培養(yǎng);
    (3)原代培養(yǎng)36h全液量換液,去除未貼壁的造血細(xì)胞,以后每3天換液一次,直到細(xì)胞80-90融合傳代。
     

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