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    不同類型的樣本的處理辦法

    發(fā)布時間: 2017-09-15  點擊次數(shù): 1279次

    一般我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培育上清或安排勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。
    1、血清
    血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
    用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細(xì)心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。
    采血過程中應(yīng)防止溶血,由于紅細(xì)胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為符號的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細(xì)菌污染,由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導(dǎo)致檢測的假陽性。
    2、安排勻漿液
    1)將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì)。
    2)將安排塊稱重,記載后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充沛
    3)將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS(臨用前參加蛋白酶按捺劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量:PBS體積=1:9的份額勻漿,例如1g的安排樣本對應(yīng)9mL的PBS,詳細(xì)體積可根據(jù)試驗需求恰當(dāng)調(diào)整,檢測后核算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
    4)吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。
    3、血漿
    用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標(biāo)本,標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。防止運用溶血或高血脂的標(biāo)本。
    常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應(yīng)細(xì)心閱讀試劑盒說明書,查看試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
    4、細(xì)胞培育上清
    取細(xì)胞培育上清到離心管,1000×g離心20min,除掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。
    5、細(xì)胞裂解液
    1)吸去培育板內(nèi)的培育基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培育基將細(xì)胞從培育板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省掉。
    2)搜集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培育基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
    3)參加適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前參加蛋白酶按捺劑)重懸細(xì)胞。一般6孔板一個孔的細(xì)胞量需求150~250μL PBS重懸。
    4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,重復(fù)凍融幾回,使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的意圖。
    5)4℃ 10000×g 離心10min,除掉細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。
    6、尿液、唾液等其他液體生物樣本
    1000×g離心20min,取上清即可檢測。
    總的來說,由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)確保一切樣本均為弄清的液體,沉積或懸浮物都應(yīng)離心去除。
    為了確保檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。
     

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