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    上海研域技術(shù)師分析ELISA試劑盒操作步驟法

    發(fā)布時(shí)間: 2017-08-11  點(diǎn)擊次數(shù): 1052次

    ELISA試劑盒組成
    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
    2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(80U/L)0.5ml×1瓶
    3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份
    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)
    ELISA試劑盒標(biāo)本要求
    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
    昆蟲(chóng)胸苷酸合成酶(thyA)elisa測(cè)定試劑盒操作步驟
    1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
    40U/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    20U/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    10U/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    5.0U/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    2.5U/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請(qǐng)避光保存。
    7.嚴(yán)格按照昆蟲(chóng)胸苷酸合成酶(thyA)elisa測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
    ELISA試劑盒計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
     

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